Semen Refrigerado y Congelado: Inseminación Artificial en Yeguas.

Cuando la yegua y el semental están lejos, es necesario recurrir a métodos de envío de semen, pero la vida útil de éste es limitada, de modo que hay que utilizar los avances tecnológicos necesarios para conservarlo. En este vídeo-reportaje el veterinario y director del Centro Veterinario ServetEq, D. Herminio Pose, nos informa sobre los procesos de refrigeración y congelación, así como de las condiciones de envío y tipo de certificados que deben acompañar al semen según sea para envíos nacionales, intracomunitarios o con terceros países.

1. Preparación del semental.
La primera fase para una recolección de semen de calidad, ya sea para semen fresco, refrigerado o congelado, consiste en la preparación y limpieza de aparato reproductor del semental, para que el material se contamine lo menos posible.

2. Preparación de la vagina artificial.

Tenemos varios métodos de extracción de semen. El más utilizado es la vagina artificial. Existen diferentes modelos pero en todas ellos la estimulación del macho se hace por presión y por temperatura adecuadas. El modelo Missouri tiene una doble capa de látex en la cual se introduce agua caliente que además de proporcionar Tª, proporciona la presión adecuada. Para sementales muy sensibles a la presión se puede conectar un manómetro a la válvula de la vagina para así conseguir la presión exacta. Los sementales eyaculan a partir de una Tª de 45º C y la mayoría lo hace en un rango entre 45 y 50ºC. Protegiendo a la capa de látex se introduce una camisa sanitaria, de un solo uso, que impide el contagio entre sementales. En el extremo de la camisa sanitaria se coloca un biberón a modo de recipiente colector en el cual se introduce un filtro para eliminar la fase de gel del semen. Para lubrificar la camisa sanitaria se emplea gel no espermicida, solamente a la entrada de la vagina, para favorecer la penetración del semental, pero contaminar lo menos posible la muestra de semen.

3. Preparación de la yegua.
Para la extracción se puede utilizar un maniquí artificial o fantoma; o bien una yegua receptiva, que esté en celo, o una yegua ovariectomizada a la cual se le aplican estrógenos para que manifieste celo en el momento que deseamos.

Un semental que se encuentre habitualmente en el centro de reproducción se le puede acostumbrar a que monte un maniquí, lo cual lleva tiempo, pero evita la necesidad de tener una yegua en celo. En sementales que solo van a congelar por un periodo de tiempo concreto se utiliza una yegua y no se derrocha tiempo en habituarlos al maniquí.

Evitar riesgos

Es importante evitar lesiones tanto en la yegua como en el semental, para eso se emplean unas trabas en la yegua que evitan que el macho pueda ser coceado. A su vez la yegua se protege con un protector de cuero en cuello y cruz, pues muchos sementales muerden durante la monta.

4. Presentación del semental y extracción con vagina artificial.

Una vez todo listo, se aproxima el semental a la yegua, simulando una monta natural y provocando que el macho penetre la vagina artificial y no a la hembra.
5. Laboratorio.Tecnología común del semen refrigerado y congelado.

Tanto para preparación del semen para congelar como para envió en fresco se realizan unas primeras fases que son comunes a ambos. En todo el proceso es muy importante controlar la temperatura a la cual se procesa el eyaculado ya que así disminuirá la mortalidad de los espermatozoides.

Después de la monta, se retira el biberón en el cual solo habrá semen filtrado ya que la parte de gel así como elementos contaminantes serán eliminados por el filtro que se colocó previamente. Se traslada el semen a un tubo córner que nos permite ver la cantidad recolectada y se introduce en una cubeta que mantiene una temperatura constante de 37ºC.

Los sementales árabes eyaculan (aunque es muy variable) entre 12 y 25 cc. A veces eyaculados menores en cantidad, producen más dosis, debido a que tienen una mayor concentración de espermatozoides por cc.

Medición de la concentración.

Un envío de semen debe tener 400 millones de espermatozoides por dosis de inseminación.

Para semen fresco se envían dos jeringas, una para cada inseminación.

Para semen congelado se empaqueta el semen en pajuelas de 0.5 cc cada una de las cuales tiene 50 millones. Un envío comercial es un conjunto de 24 pajuelas, repartidas en 3 juegos de 8 pajuelas. Cada juego se utiliza para una inseminación (8 x 50= 400 millones), lo cual permite que se insemine a la yegua 3 veces.

La concentración del eyaculado se mide con un espectrofotómetro que nos dará el número de espermatozoides por cc. Se realizan 3 lecturas y se hace el promedio.

En nuestra extracción hay 309 millones /cc. Sabiendo que tenemos que enviar 400 millones por inseminación ya podemos hacer el cálculo de la cantidad de líquido de dilución que debemos añadir.

Centrifugado.

Se añade la misma cantidad de líquido de centrifugado que de eyaculado. Dilución 1/1 para centrifugar el semen de modo que eliminamos lo más posible el líquido seminal en el que se encuentran los espermatozoides. Este líquido seminal favorece la motilidad de los espermatozoides, pero para que el semen se conserve más tiempo debemos disminuir esa motilidad que provocaría su desgaste antes de llegar a destino. Se centrifuga a 2.600 G durante 10 minutos.

Con el centrifugado los espermatozoides quedan en el fondo del tubo corner (sedimento o pellet) y el líquido seminal permanece en superficie (sobrenadante). Esto nos permite eliminar el sobrenadante y quedarnos con los espermatozoides puros.

6a. Dilución para semen refrigerado:

Al sedimento se le añade líquido de envío en la cantidad que hemos calculado para tener una concentacion para conservarlos y se cargan dos jeringas de envío con 15 cc. Para disminuir el contraste térmico, se envuelven las jeringas en papel de celulosa ya que las jeringas pasan de una tª ambiente de 20-25º C a una interior, en las cajas de envío, de 4ºC. Estas permiten conservar las dosis a 4ºC durante 24 horas. Normalmente se hace el envío a la tarde para que el semen llegue a destino a primera hora de la mañana y transcurra el menor tiempo posible.

6b. Dilución para semen congelado:

Re-suspender el sedimento centrifugado con el volumen que hemos calculado de líquido de congelación.
Cargado de pajuelas, sellado, e introducción en refrigeración a 4ºc durante 30 minutos.
Preparado de cubeta de rampa de flotación.

Esta rampa de flotación está diseñada para irse hundiendo paulatinamente en 20 minutos y que a medida que las pajuelas descienden se vayan enfriando poco a poco sin choque térmico desde 4ºC hasta los -196ºC a los que está el nitrógeno líquido. En cuanto están congeladas se trasladan al tanque de nitrógeno, donde permanecerán hasta que las pajuelas sean solicitadas por un comprador. En este momento se pasan a un tanque de envió que las mantendrá congeladas hasta la recepción del veterinario que realizará la inseminación de la yegua.

7.Descongelación de pajuelas. (para enviarlas antes o ya al llegar a la yegua)
Se extraen las pajuelas del tanque de congelación y se colocan en la cubeta a 37ºC durante 20 segundos.
Se cortan los dos extremos para que el semen caiga en un tubo de ensayo.
La calidad del semen se mide por la concentración, cantidad de vivos, la velocidad de desplazamiento, desplazamiento progresivo, etc. Los espermatozoides del caballo tienen la cola insertada excéntrica por eso se mueven con un desplazamiento curvilíneo pero de gran radio, de modo que vistos al microscopio, esa curva de desplazamiento es inapreciable. No obstante si el semen tiene un stress térmico (por exceso o por defecto de tª) los espermatozoides se moverán más lentamente y en círculos pequeños que le hará imposible su desplazamiento por el cuerno uterino.

8.Exploración de la yegua receptora
Palpación rectal: tono del útero, tamaño ovarios, presencia de folículos…

Exploración ecográfica: útero, cuernos, existencia de edema de útero, ausencia de infecciones, tamaño de los folículos…A partir de 3 cm la yegua podría ovular en cualquier momento. Habrá que fijarse también en maduración del folículo, reblandecimiento, dolor ovárico. Para acelerar la ovulación se pueden emplear Gonadotropina Coríonica Humana.

Inseminacion artificial intrauterina profunda
Se utilizan catéteres especiales para permitir al veterinario localizar la posición del extremo del catéter via rectal y poder dirigirlo al cuerno del utero que queremos, es decir el que tiene el ovario a punto de ovular.

Los Centros Autorizados para recogida de semen y embriones deben de cumplir una normativa tanto europea como nacional, siempre con supervisión de un veterinario responsable del centro, del equipo y de la trazabilidad de todo el proceso. Estos Centros deben estar rodeados perimetralmente de un vallado que impida  que ningún animal o persona acceda sin control a su interior. Los sementales deben estar en el centro ya en los 30 días previos al procesado del semen, no deben hacer monta natural en este periodo ya que podrían contagiarse de hembras infectadas  y las pruebas que deberán realizar, exigidas por la normativa que son, no tendrían validez. Tampoco harán monta natural durante el periodo de recogida de semen.

Las pruebas sanitarias que deben dar como resultado “estar libres o ser negativos a” serán contra la Anemia Infecciosa Equina, Arteritis Viral Equina (2 pruebas a intervalos de 14 días) y Metritis Contagiosa Equina (intervalos de 7 días), para semen congelado.  Para refrigeración y envíos a nivel nacional solo se exige Arteritis y Metritis.

Certificados para comercialización de semen.

Habrá distintos certificados dependiendo del lugar de destino de las dosis.

–Terceros países (comercio internacional extracomunitario). Los certificados llevarán la documentación necesaria exigida por el país de destino.

-Nacional: Los veterinarios responsables del centro están autorizados a emitir los certificados, que indicarán que las dosis están libres de las enfermedades antes citadas; así como la identificación del material genético (semen o embriones), datos semental (código genealógico, datos rendimiento…), código del Centro de procesado y código de explotación.

–Intracomunitario. El certificado sanitario lo emiten los Veterinarios Oficiales de las Oficinas Agrarias Comarcales, dicho certificado se denomina TRACES. Es un certificado informatizado que en el momento de emitirse es recibido por el país de destino.

Trazabilidad: ¿Cómo se certifica que la pajuela corresponde al el semental?

La pajuela lleva nombre del semental, código genealógico o su ULN( número único internacional otorgado a cada semental), raza y centro autorizado. Esto garantiza la certeza de que ese semen corresponde al semental. Si aún así se dudase, se podrían realizar pruebas de ADN. Todas las razas puras están genotipadas, de modo que se puede extraer ADN de la pajuela y hacer la prueba comparativa con el genotipo del semental; o al hacer el genotipo del potro, contrastarlo con el genotipo del padre.